නිෂ්පාදන
2019-nCoV සඳහා Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය
අපේක්ෂිත භාවිතය
මෙම කට්ටලය උගුරේ ස්පුබ්, නාසෝෆරින්ජියල් ස්පුබ්, බ්රොන්කොල්වෙයෝලර් සේදීමේ තරලය, ස්පුටම් භාවිතා කරමින් නව කොරෝනා වයිරසය (2019-nCoV) ගුණාත්මකව හඳුනා ගැනීම සඳහා භාවිතා කරයි. මෙම නිෂ්පාදනයේ හඳුනාගැනීමේ ප්‍රතිඵලය සායනික යොමු කිරීම සඳහා පමණක් වන අතර, එය සායනික රෝග විනිශ්චය සහ ප්‍රතිකාර සඳහා එකම සාක්ෂිය ලෙස භාවිතා නොකළ යුතුය. රෝගියාගේ සායනික ප්‍රකාශන සහ අනෙකුත් රසායනාගාර පරීක්ෂණ සමඟ ඒකාබද්ධව තත්ත්වය පිළිබඳ පුළුල් විශ්ලේෂණයක් නිර්දේශ කෙරේ.
පරීක්ෂණ මූලධර්මය
මෙම කට්ටලය එක්-පියවර RT- PCR තාක්ෂණය මත පදනම් වේ. ඇත්ත වශයෙන්ම, 2019 නව කොරෝනා වයිරස් (2019-nCoV) ORF1ab සහ N ජාන විස්තාරණ ඉලක්ක කලාප ලෙස තෝරා ගන්නා ලදී. නිශ්චිත ප්‍රයිමර් සහ ප්‍රතිදීප්ත පරීක්ෂණ (N ජාන පරීක්ෂණ FAM සමඟ ලේබල් කර ඇති අතර ORF1ab පරීක්ෂණ HEX සමඟ ලේබල් කර ඇත) සාම්පලවල 2019 නව වර්ගයේ කොරෝනා වයිරස් RNA හඳුනා ගැනීම සඳහා නිර්මාණය කර ඇත. නියැදි එකතු කිරීම, RNA සහ PCR විස්තාරණය කිරීමේ ක්‍රියාවලිය නිරීක්ෂණය කිරීම සඳහා, එමඟින් ව්‍යාජ සෘණ ප්‍රතිඵල අඩු කිරීම සඳහා, කට්ටලයට ආවේණික අභ්‍යන්තර පාලන හඳුනාගැනීමේ පද්ධතියක් (CY5 සමඟ ලේබල් කර ඇති අභ්‍යන්තර පාලන ජාන පරීක්ෂණය) ද ඇතුළත් වේ.
ප්‍රධාන සංරචක
| සංරචක | පරිමාව()48T/කට්ටලය) |
| RT-PCR ප්‍රතික්‍රියා විසඳුම | 96μl |
| nCOV ප්‍රාථමික TaqMan probemixture (ORF1ab,N ජානය,RnaseP ජානය) | 864μl |
| සෘණ පාලනය | 1500μl |
| nCOV ධනාත්මක පාලනය (l ORF1ab N Gene) | 1500μl |
තමන්ගේම ප්‍රතික්‍රියාකාරක: RNA නිස්සාරණය හෝ පිරිසිදු කිරීමේ ප්‍රතික්‍රියාකාරක. සෘණ/ධනාත්මක පාලනය: ධනාත්මක පාලනය යනු ඉලක්කගත කොටස අඩංගු RNA වන අතර සෘණ පාලනය යනු න්‍යෂ්ටික අම්ල-නිදහස් ජලයයි. භාවිතය අතරතුර, ඒවා නිස්සාරණයට සහභාගී විය යුතු අතර බෝවන ලෙස සැලකිය යුතුය. අදාළ රෙගුලාසිවලට අනුකූලව ඒවා හැසිරවිය යුතු අතර බැහැර කළ යුතුය.
අභ්‍යන්තර යොමු ජානය මානව RnaseP ජානයයි.
ගබඩා කොන්දේසි සහ කල් ඉකුත් වීමේ දිනය
-20±5℃, මාස 6ක් සඳහා වලංගු, 5 වතාවකට වඩා නැවත නැවත කැටි කිරීම සහ දියවීම වළක්වා ගන්න.
අදාළ උපකරණය
FAM / HEX / CY5 සහ අනෙකුත් බහු-නාලිකා ප්‍රතිදීප්ත PCR උපකරණ සමඟ.
නිදර්ශක අවශ්‍යතා
1. අදාළ නිදර්ශක වර්ග: උගුරේ ස්පුබ්, නාසෝෆරින්ජියල් ස්පුබ්, බ්රොන්කොල්වෙයෝලර් සේදීමේ තරලය, ස්පුටම්.
2. නිදර්ශක එකතු කිරීම (අසප්ටික් තාක්ෂණය)
ෆරින්ජියල් ස්පුබ්: ටොන්සිල සහ පසුපස ෆරින්ජියල් බිත්තිය එකවර ස්පුබ් දෙකකින් පිස දමන්න, ඉන්පසු සාම්පල ද්‍රාවණය අඩංගු පරීක්ෂණ නළයක ස්පුබ් හිස ගිල්වන්න.
සෙම: රෝගියාට ගැඹුරු කැස්සක් ඇති වූ පසු, කැස්ස ඇති වූ සෙම සාම්පල ද්‍රාවණය අඩංගු ඉස්කුරුප්පු කැප් පරීක්ෂණ නළයකට එකතු කරන්න; බ්රොන්කොඇල්වියොලර් සේදීමේ තරලය: වෛද්‍ය වෘත්තිකයන් විසින් සාම්පල ලබා ගැනීම. 3. සාම්පල ගබඩා කිරීම සහ ප්‍රවාහනය කිරීම.
වෛරස් හුදකලා කිරීම සහ RNA පරීක්ෂාව සඳහා නිදර්ශක හැකි ඉක්මනින් පරීක්ෂා කළ යුතුය. පැය 24ක් ඇතුළත හඳුනාගත හැකි නිදර්ශක 4℃ උෂ්ණත්වයකදී ගබඩා කළ හැක; 24ක් ඇතුළත හඳුනාගත නොහැකි ඒවා.
පැය ගණන් -70℃ හෝ ඊට අඩු උෂ්ණත්වයක ගබඩා කළ යුතුය (-70℃ ගබඩා තත්වයක් නොමැති නම්, ඒවා
තාවකාලිකව -20℃ ශීතකරණයේ ගබඩා කර ඇත). ප්‍රවාහනයේදී සාම්පල නැවත නැවත කැටි කිරීම සහ දියවීම වැළැක්විය යුතුය. සාම්පල එකතු කිරීමෙන් පසු හැකි ඉක්මනින් රසායනාගාරයට යැවිය යුතුය. සාම්පල දිගු දුරක් ප්‍රවාහනය කිරීමට අවශ්‍ය නම්, වියළි අයිස් ගබඩා කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.
පරීක්ෂණ ක්‍රම
1 නියැදි සැකසීම සහ RNA නිස්සාරණය (නියැදි සැකසුම් ප්‍රදේශය)
RNA නිස්සාරණය සඳහා ද්‍රව සාම්පල 200μl ගැනීම නිර්දේශ කෙරේ. අදාළ නිස්සාරණ පියවර සඳහා, වාණිජ RNA නිස්සාරණ කට්ටලවල උපදෙස් බලන්න. සෘණ සහ සෘණ යන දෙකම
මෙම කට්ටලයේ පාලකයන් නිස්සාරණයට සම්බන්ධ විය.
2 PCR ප්‍රතික්‍රියාකාරක සකස් කිරීම (ප්‍රතික්‍රියාකාරක සකස් කිරීමේ ප්‍රදේශය)
2.1 කට්ටලයෙන් සියලුම සංරචක ඉවත් කර කාමර උෂ්ණත්වයේ දී දියකර මිශ්‍ර කරන්න. භාවිතයට පෙර තත්පර කිහිපයක් සඳහා 8,000 rpm හි කේන්ද්‍රාපසාරී කරන්න; අවශ්‍ය ප්‍රතික්‍රියාකාරක ප්‍රමාණය ගණනය කරන්න, එවිට ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතිය පහත වගුවේ දැක්වෙන පරිදි සකස් කෙරේ:
| සංරචක | N සේවය (25µl පද්ධතිය) |
| nCOV ප්‍රයිමර් TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR ප්‍රතික්‍රියා විසඳුම | 2 µl × N |
| *N = පරීක්ෂා කරන ලද සාම්පල ගණන + 1 (සෘණ පාලනය) + 1 (nCOV)ධනාත්මක පාලනය) | |
2.2 සංරචක හොඳින් මිශ්‍ර කිරීමෙන් පසු, නල බිත්තියේ ඇති සියලුම ද්‍රව නලයේ පතුලට වැටීමට කෙටි කාලයක් කේන්ද්‍රාපසාරී කරන්න, ඉන්පසු 20 µl විස්තාරණ පද්ධතිය PCR නළයට අඩු කරන්න.
3 නියැදීම (නියැදි සකස් කිරීමේ ප්‍රදේශය)
නිස්සාරණයෙන් පසු සෘණ සහ ධනාත්මක පාලක වලින් 5μl එකතු කරන්න. පරීක්ෂා කිරීමට නියමිත සාම්පලයේ RNA PCR ප්‍රතික්‍රියා නලයට එකතු කරනු ලැබේ.
නළය තදින් වසා, විස්තාරණ හඳුනාගැනීමේ ප්‍රදේශයට මාරු කිරීමට පෙර තත්පර කිහිපයක් 8,000 rpm හි කේන්ද්‍රාපසාරී කරන්න.
4 PCR විස්තාරණය (විස්තාරණය කළ හඳුනාගැනීමේ ප්‍රදේශය)
4.1 ප්‍රතික්‍රියා නළය උපකරණයේ නියැදි කොටුව තුළ තබා, පහත පරිදි පරාමිතීන් සකසන්න:
| අදියර | සයිකල් අංකය | උෂ්ණත්වය(°C) | කාලය | එකතුවඅඩවිය |
| ආපසු හැරවීමපිටපත් කිරීම | 1 | 42 | විනාඩි 10 | - |
| පූර්ව-ප්‍රතිනිර්මාණයn | 1 | 95 | විනාඩි 1 | - |
| සයිකල් | 45 | 95 | තත්පර 15 යි | - |
| 60 | 30 ගණන් | දත්ත රැස් කිරීම |
උපකරණ හඳුනාගැනීමේ නාලිකා තේරීම: ප්‍රතිදීප්ත සංඥාව සඳහා FAM、HEX、CY5 නාලිකාව තෝරන්න. යොමු ප්‍රතිදීප්ත NONE සඳහා, කරුණාකර ROX තෝරා නොගන්න.
5 ප්‍රතිඵල විශ්ලේෂණය (සැකසීම සඳහා එක් එක් උපකරණයේ අත්හදා බැලීමේ උපදෙස් වෙත යොමු වන්න)
ප්‍රතික්‍රියාවෙන් පසු, ප්‍රතිඵල සුරකින්න. විශ්ලේෂණයෙන් පසු, රූපයට අනුව මූලික රේඛාවේ ආරම්භක අගය, අවසන් අගය සහ එළිපත්ත අගය සකසන්න (පරිශීලකයාට සැබෑ තත්ත්වය අනුව සකස් කළ හැකිය, ආරම්භක අගය 3~15 ලෙස සැකසිය හැක, අවසන් අගය 5~20 ලෙස සැකසිය හැක, ගැලපීම) ලඝුගණක ප්‍රස්ථාරයේ කවුළුවේ එළිපත්තෙහි, එළිපත්ත රේඛාව ලඝුගණක අවධියේ ඇති අතර, සෘණ පාලනයේ විස්තාරණ වක්‍රය සරල රේඛාවක් හෝ එළිපත්ත රේඛාවට පහළින් ඇත).
6 ක්වාටි පාලනය (පරීක්ෂණයට ක්‍රියා පටිපාටි පාලනයක් ඇතුළත් වේ) සෘණ පාලනය: FAM, HEX, CY5 හඳුනාගැනීමේ නාලිකා සඳහා පැහැදිලි විස්තාරණ වක්‍රයක් නොමැත.
COV ධනාත්මක පාලනය: FAM සහ HEX හඳුනාගැනීමේ නාලිකාවල පැහැදිලි විස්තාරණ වක්‍රය, Ct අගය≤32, නමුත් CY5 නාලිකාවේ විස්තාරණ වක්‍රයක් නොමැත;
ඉහත අවශ්‍යතා එකම අත්හදා බැලීමේදී එකවර සපුරාලිය යුතුය; එසේ නොමැතිනම්, අත්හදා බැලීම අවලංගු වන අතර නැවත නැවත කිරීමට අවශ්‍ය වේ.
7 ප්‍රතිඵල නිර්ණය කිරීම.
7.1 පරීක්ෂණ සාම්පලයේ FAM සහ HEX නාලිකා වල වර්ධක වක්‍රයක් හෝ Ct අගය> 40 ක් නොමැති නම් සහ CY5 නාලිකාවේ වර්ධක වක්‍රයක් තිබේ නම්, සාම්පලයේ 2019 නව කොරෝනා වෛරස් (2019-nCoV) RNA නොමැති බව විනිශ්චය කළ හැකිය;
.2 පරීක්ෂණ සාම්පලයේ FAM සහ HEX නාලිකා වල පැහැදිලි විස්තාරණ වක්‍ර තිබේ නම් සහ Ct අගය ≤40 නම්, නියැදිය 2019 නව කොරෝනා වයිරසයට (2019-nCoV) ධනාත්මක බව විනිශ්චය කළ හැකිය.
7.3 පරීක්ෂණ සාම්පලයට FAM හෝ HEX හි එක් නාලිකාවක පමණක් පැහැදිලි විස්තාරණ වක්‍රයක් තිබේ නම්, සහ Ct අගය ≤40 නම්, සහ අනෙක් නාලිකාවේ විස්තාරණ වක්‍රයක් නොමැති නම්, ප්‍රතිඵල නැවත පරීක්ෂා කළ යුතුය. නැවත පරීක්ෂණ ප්‍රතිඵල අනුකූල නම්, නියැදිය නව සඳහා ධනාත්මක බව විනිශ්චය කළ හැකිය.
කොරෝනා වයිරස් 2019 (2019-nCoV). නැවත පරීක්ෂණ ප්‍රතිඵලය ඍණාත්මක නම්, නියැදිය 2019 නව කොරෝනා වයිරසයට (2019-nCoV) ඍණාත්මක බව විනිශ්චය කළ හැකිය.
ධනාත්මක විනිශ්චය වටිනාකම
කට්ටලයේ යොමු CT අගය තීරණය කිරීම සඳහා ROC වක්‍ර ක්‍රමය භාවිතා කරන අතර අභ්‍යන්තර පාලන යොමු අගය 40 කි.
පරීක්ෂණ ප්‍රතිඵල අර්ථ නිරූපණය
1. සෑම අත්හදා බැලීමක්ම සෘණ සහ ධනාත්මක පාලනයන් සඳහා පරීක්ෂා කළ යුතුය. පරීක්ෂණ ප්‍රතිඵල තීරණය කළ හැක්කේ පාලනයන් තත්ත්ව පාලන අවශ්‍යතා සපුරාලන විට පමණි.
2.FAM සහ HEX හඳුනාගැනීමේ නාලිකා ධනාත්මක වූ විට, පද්ධති තරඟකාරිත්වය හේතුවෙන් CY5 නාලිකාවේ (අභ්‍යන්තර පාලන නාලිකාව) ප්‍රතිඵලය සෘණ විය හැකිය.
3.අභ්‍යන්තර පාලන ප්‍රතිඵලය සෘණාත්මක වූ විට, පරීක්ෂණ නළයේ FAM සහ HEX හඳුනාගැනීමේ නාලිකා ද සෘණ නම්, එයින් අදහස් වන්නේ පද්ධතිය අක්‍රිය කර ඇති බව හෝ ක්‍රියාකාරිත්වය වැරදි බවයි, පරීක්ෂණය වලංගු නොවේ. එබැවින්, සාම්පල නැවත පරීක්ෂා කළ යුතුය.
